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KLH偶联方法
我们用MBS活化KLH,这样能将载体蛋白(KLH)上面的自由-SH与多肽末端的Cys的侧链-SH连接起来,这种方法直接,特异性高,而且稳定,通常选择对免疫不重要的一端进行交联。 EDC活化载体上的-COOH,将载体的-COOH和多肽的-NH2连接起来也是一种可行的方法。但我们只建议在多肽序列中有多个Cys时采用该方法。如果肽链中含有多个-COOH或-NH2基因,不建议使用该方法,因为会造成多重点交联的情况,使多肽结构受影响。常用载体蛋白除KLH外,还有BSA,OVA等,KLH的优势是它不干扰ELISA或Western Blot等实验。
KLH偶联溶液混浊的原因
KLH是一个很大的并且聚合的蛋白。因为它的结构和大小,它在水中的溶解度是很有限的,因此是乳状,这并不影响它的免疫性,这种混浊的溶液可以直接免疫动物。
多肽偶联蛋白
对在动物体内产生免疫反应而言,大多数多肽的分子量都太小。将多肽与载体蛋白如KLH等偶联之后,不仅能增加抗原的大小,也能增强免疫性。我们可以提供与KLH,BSA和OVA蛋白的偶联。大多数客户选择与KLH交联,因为KLH的免疫性更好,而且BSA在很多实验中作为Blocking试剂,由于动物体内既会产生对多肽的抗体也会产生对载体蛋白的抗体,这样会出现假阳性。
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